Флуоресцентната микроскопия с пълно вътрешно отражение
От 7.4.1976г.
Възможността да се наблюдават ярките флуоресцентни молекули на тъмен фон с флуоресцентната микроскопия, чрез която се оцветява полето се осъществява благодарение на молекулярната специфичност на наблюдаваните частици. Това предполага, че с флуоресцентната микроскопия ще се локализира точното място на единичните молекули.
Потвърждението на тази теория идва, когато през 1976 година Томас Хирсфелд използвал флуоресцентен микроскоп. Той локализирал мястото на определени единични молекули, обвързани с десетки флуорофори, които преминават през тънък светлинен слой. За съжаление на този етап все още съществуват някои ограничения, затрудняващи напредъка. Въпреки това, през следващите две десетилетия учените стават свидетели на локализирането на единични флуорофори на ниски температури, преминаващи през фокусиран лазерен лъч.
През 1993 година тази ситуация се променила, когато Ерик Бетциг и Робърт Чичстър постигат изображение на единични флуорофори на стайна температура с нов вид микроскоп, наречен NSOM (near-field scanning optical microscopе), сканиращ високоскоростно чрез сондиране на изключително малки участъци в пробата. Това осигурява локализацията, точния молекулярен мащаб и ориентация. Потенциалът, заложен в едномолекулните сканирани изображения за съжаление не е особено приложим за биологичните проби поради високата си степен на инвазивност и сложност.
През 1995 година Тошио Янаджида и негови колеги използват и оптимизират устройството на флуоресцентен микроскоп с пълно вътрешно отражение, за да визуализират единични миозинови молекули маркирани с флуорофор. Основната им цел е да видят преобразуването на АТФ (аденозинтрифосфат), маркиран с различен флуорофор. За разлика от предишните методи, използващи имобилизирани молекули, това изследване показа, че изображенията с флуоресцентен микроскоп с пълно вътрешно отражение на много молекули във воден разтвор за период от няколко секунди преди избелването му демонстрира пригодността му биологична употреба.
През 1998 г. Съни Хий провежда изследване, включващо присъединяване на ФАД (флавинадениндинуклеотид) в активния център на холестерол оксидаза. Неговата цел е да се разкрие, че тази ензимна активност е повлияна от своеобразната молекулна памет, съхранена в протеина. Това поведение е напълно неочаквано за Хий и останалите, провели експеримента и показва недвусмислено, че флуоресцентната микроскопия с пълно вътрешно отражение може да хвърли нова светлина върху привидно добре характеризираните микроскопски системи. Подобни ензимно-оборотни анализи, разработени от други групи в крайна сметка води до определяне на последователността на отделните молекули ДНК.
Статията е част от историята на:
Продукти свързани със СТАТИЯТА
БОИРЕР УРЕД ЗА ПОЧИСТВАНЕ НА ЛИЦЕ FC 100
Безплатна доставка за България!ЛАНАФОРМ УРЕД МИНИ ЗА МИКРОДЕРМАБРАЗИО
Безплатна доставка за България!МУЛТИЧЕСТОТЕН ГЕНЕРАТОР BIOGENIS
Безплатна доставка за България!ЛАЙКА НАКРАЙНИК ЗА СПАГЕТИ LINGUINE 3 мм и PAPPARDELLE 45 мм ЗА МАШИНА ЗА ПАСТА PM20000
РИЪР УРЕД ЗА ПОДГРЯВАНЕ НА ШИШЕТА 3595
ЛАНАФОРМ ДИФУЗОР (ДИФУЗЕР) FUDJI
Библиография
1. Betzig, E. & Chichester, RJ Single molecules observed by near-field scanning optical microscopy . Science 262 , 1422–1425 (1993)
2. Funatsu, T., Harada, Y., Tokunaga, M., Saito, K. & Yanagida, T. Imaging of single fluorescent molecules and individual ATP turnovers by single myosin molecules in aqueous solution. Nature 374 , 555–559 (1995)
3. Schmidt, T., Sch?tz, GJ, Baumgartner, W., Gruber, HJ & Schindler, H. Imaging of single molecule diffusion . Proc. Natl Acad. Sci. USA 93, 2926–2929 (1996)
4. Lu, HP, Xun, L. & Xie, XS Single-molecule enzymatic dynamics . Science 282 , 1877–1882 (1998)
СТАТИЯТА е свързана към
- Създаване на микроскопа
- Феноменален ли е Феноменът на Фролов?
- Старинни микроскопи от XVII до XIX век
- 15 електрически уреда, които в миналото са изглеждали съвсем различно
- Вижте как са се променили 22 ежедневни предмета от миналото до днес
- История на дефибрилаторите
- Ларингоскоп на Гьодел от 1930 година
- Синхронизатор на мозъчните вълни за подобряване на анестезията
- Ето как са изглеждали ранните образци на познати електроуреди
- Съвременни диализатори
Коментари към Флуоресцентната микроскопия с пълно вътрешно отражение